本规范遵从GB/T 1.1-2000《规范化作业导则 第1部分：规范的结构和编写规矩》和GB/T 20001.4-2001《规范编写规矩 第4部分：化学分析办法》的编写规矩。

  本规范规则了食物中苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ的高效液相色谱测定办法。

  办法最低检测限：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ均为10μg/kg。

  样品经溶剂提取、固相萃取净化后，用反相高效液相色谱-紫外可见光检测器进行色谱分析，选用外标法定量。

  4.8 层析用氧化铝(中性100目~200目）：105℃于燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中参加2mL水降活，混匀后密封，放置12h后运用。

  注：不同厂家和不同批号氧化铝的活度有差异，须依据详细置办的氧化铝产品略作调整，活度的调整选用规范溶液过柱，将1μg/mL的苏丹红的混合规范溶液1mL加到柱中，用5%丙酮正己烷溶液60mL彻底洗脱为准，4种苏丹红在层析柱上的流出次序为苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅲ，可依据每种苏丹红的回收率作出判别。苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅳ的回收率较低标明氧化铝活性偏低，苏丹红Ⅲ的回收率偏低时标明活性偏高。

  4.9 氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，轻敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL正己烷预淋洗，洗净柱中杂质后，备用（苏丹红专用柱）。

  4.11 规范物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%

  4.12 规范贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg（按实践含量折算），用溶解后用正己烷定容至250mL。

  称取1 g~5g（精确至0.001g）样品于三角瓶中，参加10mL ~ 30mL正己烷，超声5min，过滤，用10mL正己烷洗刷残渣数次，至洗出液无色，兼并正己烷液，用旋转蒸腾仪浓缩至5mL以下，渐渐参加氧化铝层析柱中(4.9），为确保层析作用，在柱中坚持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不该使柱干枯，用正己烷少数屡次淋洗浓缩瓶，同时注入层析柱。操控氧化铝表层吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液彻底流出后，视样品中含油类杂质的多少用10mL~ 30mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去悉数正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL（4.10） 洗脱，搜集、浓缩后，用丙酮搬运并定容至5mL，经0.45 μm有机滤膜过滤后待测。

  称取0.5g~2g（精确至0.001g）样品于小烧杯中，参加适量正己烷溶解(约1 mL~ 10mL）， 难溶解的样品可于正己烷中加温溶解。按7.1.1中 “渐渐参加到氧化铝层析……过滤后待测”操作。

  称取10g~20g（精确至0.01g）样品于离心管中，加10mL ~ 20mL水将其涣散成糊状，含增稠剂的样品多加水，参加30mL正己烷：丙酮= 3：1， 匀浆5min， 3000rpm离心10min， 吸出正己烷层，于基层再参加20mL×2次正己烷匀浆，离心，兼并3次正己烷，参加无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸腾仪上蒸干并坚持5分钟，用5mL正己烷溶解残渣后，按7.1.1中“渐渐参加到氧化铝层析柱……过滤后待测” 操作。

  称取破坏样品10g~20g（精确至0.01g）于三角瓶中，参加60mL 正己烷充沛匀浆5min，滤出清液，再以20mL×2次正己烷匀浆，过滤。兼并3次滤液，参加5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸腾仪上蒸至5mL以下，按7.1.1中“渐渐参加到氧化铝层析柱……过滤后待测”操作。

  ■梯度洗脱：流速：1mL/min 柱温： 30℃ 检测波长： 苏丹红Ⅰ478nm ；苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ 520nm；于苏丹红Ⅰ出峰后切换。进样量10μL。梯度条件见表1。

  7.2.2规范曲线mL ，用正己烷定容至25mL，此规范系列浓度为0、0.16、0.32、0.64、1.28、2. 56μg/mL，制作规范曲线）核算苏丹红含量

  C——由规范曲线得出的样液中苏丹红的浓度，单位为微克每亳升(μg/mL）；

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